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分享一下钼钒酸显色液的配置方法
更新时间:2020-09-28
钼钒酸显色液
有两类:根据被检物的化学组成是否遭受破坏,分为破坏性显色液和非破坏性显色液。
在实验中我们一般将它调配成A,B两种液体,当需要显色时就分别加入A,B液,当混合液与实验中复合物(抗原抗体复合物)反应就会产生显色效果。
A液一般由:PBS缓冲液,柠檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,过氧化氢(过氧化氢挥发性太高,容易丢失,我们现在正用过氧化脲来代替,效果还不错)组成。
B液一般由:PBS缓冲液,柠檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,硫代硫酸钠等。
由于
钼钒酸显色液
的反应一旦开始就一直持续反应,所以,当达到理想效果时一定要终止反映,就需要加入终止液了。
钼钒酸显色液的配置方法:
试剂:
1)盐酸(1+1水溶液)硝酸高氯酸
2)钒钼酸铵显色剂:称取偏钒酸铵1.25g,加硝酸250ml,另称取钼酸铵25g,加水400ml加热溶解,在冷却的条件下,将两种溶液混合,用水定容成1000ml。避光保存,若生成沉淀,则不能继续使用。
3)磷标准液:将磷酸二氢钾在105oC干燥1h,在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水,定量转入1000ml容量瓶中,加入硝酸3ml,用水稀释至刻度,摇匀,即为50mg/ml的磷标准液。
试样的分解
干法:与Ca测定试样的制备方法一致,在实际中,Ca,P使用同一分解液。
标准曲线的制备:
准确移取磷酸标准液,取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0ml于50ml容量瓶中,各加钒钼酸铵显色剂10ml,用水稀释至刻度,摇匀,常温下放置10min以上,以0ml溶液为参比,用10mm比色池,在420nm波长下,用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
试样的测定:
准确移取试样分解液0.5ml—10ml(含磷量50—750mg)(实际中取0.5ml)于50ml容量瓶中,加入钒钼酸胺显色剂10ml,按5的方法显色和比色测定,测得试样分解液的吸光度,用标准曲线查得试样分解液的含磷量。一般先要将植物样品的消化,再蒸馏、吸收和滴定。
测定N的话一般用凯氏法测定,测P一般用钼蓝比色法在分光光度计(72型)读出消光值,对比标准曲线得出。
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